CE реагента BsaI быстрого энзима пищеварения 5-15Min ДНК биохимический одобрил

Энзимы BsaI

энзимы серии проектированных энзимов ограничения для быстрого пищеварения ДНК в 5-15 минимальных энзимах можно использовать для того чтобы усвоить продукты плазмиды, генного и вирусных ДНК так же, как PCR. Все энзимы показывают главную деятельность во всеобщем буфере, поэтому упростили ферментационную систему реакции пищеварения. Кроме того, энзимы обеспечивают превосходное дублирование энзима, позволяющ легкому пищеварению шаблонов субстрата сверхнормальных или трудных.

Доставка и хранение

Компоненты погружены с пузырем со льдом и могут храниться на -20°C на 2 лет.

Резать место

5' - GGTCTC (N)1↓-3 '

3' - CCAGAG (N)5↑-5 '

Порекомендованные условия реакции

Буфер 1× FuniCut™; Инкубируйте на 37℃.

Термальное инактивирование

Инкубация на 80℃ на 20 MIN.

Проверка качества

1. Определение деятельности: 1 ДНК μg pPIC9K совершенно была усвоена с 1 μL энзима в минуте 15 на 37℃ в полном томе реакции μL 20.

2. Увеличиваемый Assay деятельности при инкубации/звезды: Никакое обнаруженное ухудшение 1 ДНК μg pPIC9K должной к загрязнению нуклеиназы или деятельности при звезды не произошло во время инкубации с 1 μL FuniCut™ BsaI на 3 часа на 37℃. Более длинная инкубация может привести в деятельности при звезды.

3. Перешнуровка и Assay Recleavage (L/R): После усвоенный с энзимом 1μL под оптимальным состоянием, повторно используйте продукт от пищеварения смогите быть перевязано под лигазой ДНК T4 на 22℃. Продукт перешнуровки может быть recleavaged энзимом.

4. Неспецифичная деятельность при эндонуклеазы: Инкубация 1 энзима μL с 1 supercoiled μg ДНК плазмиды на 4 часа на 37℃ привела в никаком изменении supercoiled состояния.

Инструкции

1. Протокол для быстрого пищеварения различной ДНК

1,1 комбайн следующие компоненты реакции на льде в заказе показали:

[Примечание]: очищенные *For продукты PCR. Количество буфера 10× FuniCut™ может быть уменьшено к μL 2 должному к остальной ионной прочности в unpurified продуктах PCR. Был порекомендованы, что был продукт PCR очищенным прежним пищеварением когда продукт PCR будет использован для клонировать.

1,2 смешивание нежно (сделать не вортекс) и закрутка вниз.

1,3 инкубируйте на 37℃ на минута 15 (ДНК плазмиды) или на минута 15-30 (продукт PCR) или на минута 30-60 (генная ДНК).

1,4 опционный: Деактивируйте энзим путем нагревать на минута 20 на 80℃.

2. Двойное и множественное пищеварение ДНК

2,1 используйте 1 μL каждого энзима и масштабируйте вверх условия реакции соотвественно.

2,2 совмещенный том энзимов в смеси реакции не должен превысить 1/10 из полного тома реакции.

2,3 если энзимы требуют различных температур реакции, то начало с энзимом который требует более низкой температуры, тогда добавляет второй энзим и инкубирует на более высокой температуре.

3. Масштабирование вверх по реакции пищеварения ДНК плазмиды

[Примечание]: Инкубация в термостате воды, термостате металла или термостате песка. Увеличьте время инкубации если полный том реакции превышает μL 20.

Количество мест опознавания в ДНК