Реагент всеобщего смешивания мастера системы мултиплекса QPCR TaqMan биохимический

Смешивание всеобщего qPCR системы мултиплекса TaqMan мастерское

Принципы проектирования праймера:

1. Порекомендованы, что находит длина продукта амплификации между 80-300 bp;

2. Длина праймера: 18-25 bp;

3. Содержание основания G+C в праймерах должно находиться между 40%-60%;

4. Разница в значения Tm между передними праймерами и обратными праймерами чем 2℃, и значение Tm между 58-62℃ самые лучшие;

5. Randomness низкопробного распределения;

6. Праймеры не должны содержать само-комплементарные последовательности, в противном случае они сформируют вторичную структуру hairpin;

7. Там должно быть не больше чем 4 комплементарное или гомологичные основания между 2 праймерами, в противном случае димер праймера будет сформирован, особенно комплементарное перекрытие на 3' конец;

8. Предложены, что будет 3' терминальное основание праймера g или c;

9. Никакие другие неспецифичные продукты не были найдены в результатах сравнения NCBI.

Введение смешивания всеобщего qPCR системы мултиплекса TaqMan мастерского:

Этот продукт решение примикса 2x для qPCR используя метод флуоресцирования зеленого цвета I GSK химерный. Компонент ядра, полимераза ДНК Taq, жар-активированная полимераза ДНК преграженная методом антитела, который может эффектно заблокировать неспецифичную амплификацию под низкими температурными условиями. Между тем, совмещенный с буфером реакции оптимизировал для qPCR, полимераза ДНК Taq очень соответствующая для высокой реакции qPCR характерности и чувствительности. Хорошую стандартную кривую можно получить в широкой количественной области, которая точна, возпроизводима и надежна для количественного анализа генов цели. В то же время, этот продукт содержит особенную краску ссылки ROX пассивную которая соответствующая для пользы во всех аппаратурах qPCR, и никакая потребность отрегулировать концентрацию ROX на различных аппаратурах. Голубая краска добавлена в примиксе, который имеет влияние трейсера добавления образцов, и желтый разжижитель шаблона обеспечен в то же время. Когда шаблон разбавлен с желтым разжижителем шаблона и добавил в голубой примикс реакции, изменения цвета от сини к зеленому цвету, который может сыграть роль трейсера в подготовке процесса системы реакции и предотвратить утечку или misaddition. Спектры голубых и желтых красок не перекрывают с красками qPCR и не влияют на результаты реакции.

Протокол/процедуры по Assay о смешивании всеобщего qPCR системы мултиплекса TaqMan мастерском:

1. (Опционное) разбавление шаблона:

Этот набор обеспечивает ЖЕЛТЫЙ буфер разбавления шаблона 40x, 40 разбавленное створками желтое разбавление шаблона которое можно использовать точно для того чтобы определить был добавлен ли шаблон к жидкости реакции qPCR путем изменение цвета жидкости. Принимать систему реакции qPCR 20ul в качестве примера, согласно количеству шаблона разбавления добавил в решение реакции qPCR 20ul, соответствуя метод разбавления первоначального шаблона можно сослаться на следующую таблицу (принимая первоначальный шаблон разбавленный к 100ul в качестве примера):

Пример:

2ul разбавило шаблон должно быть добавлено к системе реакции qPCR 20ul.

Принимающ систему разбавления шаблона 100ul в качестве примера, когда первоначальный том шаблона 20ul, добавлен буфер разбавления шаблона 25ul 40x желтый, и после этого свободная от Нуклеиназ вода 55ul добавлена к полному тому 100ul.

ЖЕЛТЫЙ БУФЕР РАЗБАВЛЕНИЯ ШАБЛОНА 40x теперь 10x. Добавьте 2ul разбавленного шаблона в буфер разбавления разбавления 20ul, и окончательный буфер разбавления шаблона ЖЕЛТОГО ЦВЕТА 40× 1x. В заключение, желтый буфер разбавления шаблона должен быть 1x в окончательной системе qPCR.

Информация о продукте смешивания всеобщего qPCR системы мултиплекса TaqMan мастерского:

Условия хранения и регуляции со смешиванием всеобщего qPCR системы мултиплекса TaqMan мастерским:

Влажный транспорт сумки льда; Сохраненный на температуре -20℃, действительной на 12 месяца.

Примечание: Если шаблону не нужно быть разбавленным, или если не использован разжижитель шаблона G3362-2, то вы можете проигнорировать этот шаг.

2. процедура по реакции PCR (смогите быть отрегулировано согласно аппаратурам):

a: Если характерности амплификации нужно быть улучшенным, то процедуру по или температуру нагрева при отжиге 2-шага можно использовать; Для того чтобы улучшить эффективность амплификации, процедуру по 3-шага или время расширения можно использовать.

Примечание:

1. Пожалуйста несите устранимые перчатки во время деятельности для избежания загрязнения рНКазы.

2. Обратные продукты транскрипции можно хранить на -20℃ на короткое время. Если долгосрочное хранение необходимо, то порекомендованы, что хранит они на -80℃ после паковать для избежания повторенных циклов замораживани-таяния.

3. Если шаблон eukaryotic начала, то порекомендованы, что выбирает Oligo (dT) праймер 18 и спаривает его с 3' поли кабель eukaryotic mRNA для того чтобы получить самый высокий выход без сокращений cDNA.

4. Для обратной транскрипции prokaryotic РИБОНУКЛЕИНОВОЙ КИСЛОТЫ, случайный праймер Hexamer или праймер Джин специфический должны быть использованы.

5. Случайный праймер Hexamer имеет широкую применимость и соответствующий для mRNA, rRNA, tRNA, небольшой РИБОНУКЛЕИНОВОЙ КИСЛОТЫ и шаблонов lncRNA.

6. Если обратная транскрипция следовать assay qPCR, то Oligo (dT) праймер 18 и случайный праймер Hexamer можно смешать для того чтобы сделать эффективностью синтеза cDNA во всех регионах mRNA это же, которое помогает улучшить подлинность и повторимость количественных результатов.

7. Если последующие праймеры qPCR конструированы через exons, то шаг удаления генома можно снять.

Общие проблемы и решения:

Если вам нужна больше информации о смешивании всеобщего qPCR системы мултиплекса TaqMan мастерском, то пожалуйста позвольте нам знать онлайн, спасибо.